siRNA 套餐
為了回饋廣大客戶對本公司的鼎力支持,特推出 RNAi 系列優惠套餐，供廣大新老客戶選擇。
有效性承諾
客戶只需提供基因序列 GeneID 或者 Accession number, 我們免費幫您設計選擇合適的位點，
siRNA oligo 細胞轉染效率達到 70%以上，我們可以保證至少有一對可以有效的抑制相應基因
（mRNA)的表達,抑制效率可達 70％以上.
產品描述
目錄號 |
產品名稱 |
規格 |
純化方式 |
交貨期限 |
|
A10001 |
普通 siRNA 經濟型套餐-A |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
A10002 |
普通 siRNA 實惠型套餐-B |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
A10003 |
化學修飾 siRNA 經濟型套餐-C |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
A10004 |
化學修飾 siRNA 實惠型套餐-D |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
A10005 |
熒光修飾 siRNA 經濟型套餐-E |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
A10006 |
熒光修飾 siRNA 實惠型套餐-F |
1 |
套 |
HPLC |
6 個工作日 |
普通 siRNA 經濟型套餐 A
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
3 對（3×2 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
普通 siRNA 實惠套餐 B
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
4 對（4×4 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
化學修飾 siRNA 經濟套餐 C
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
3 對（3×2 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
化學修飾 siRNA 實惠套餐 D
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
4 對（4×4 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
熒光修飾 siRNA 經濟套餐 E
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
3 對（3×2 OD） |
HPLC |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
|
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
熒光修飾 siRNA 實惠套餐 F
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
4 對（4×4 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
in vivo 化學修飾 siRNA 經濟套餐 G（全鏈甲氧修飾，末端膽固醇修飾）
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
3 對（3×2 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
in vivo 化學修飾 siRNA 實惠套餐 H（全鏈甲氧修飾，末端膽固醇修飾）
套餐內容 |
規格 |
純化方式 |
目的基因 siRNA oligos |
4 對（4×4 OD） |
HPLC |
陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
FAM 標記陰性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
陽性對照 siRNA oligos |
1 對（1×1 OD） |
HPLC |
實驗數據
siRNA Real-Time PCR 結果分析
對于 RNAi 實驗而言，我們通常需要知道的是某一特定細胞在導入 siRNA 前后某一特定基因的
表達變化情況來判斷 siRNA 起到了 Gene Knockdown 作用。應用熒光定量 PCR 的方法，可以
通過兩種途徑來實現上述判斷，一是測定特定細胞在導入 siRNA 前后某一特定基因 mRNA 數量
的變化，即為絕對定量；二是通過檢測特定基因與某一管家基因在在導入 siRNA 前后相對表達情況的變化，即為相對定量。通常采用相對定量的方法來檢測 siRNA 的 Gene Knockdown 作用。
1．Real-Time PCR 實驗設計
Real-Time PCR 實驗設計時應包括實驗組（導入 siRNA），陰性對照（Negative Control）和 Mock Transfaction 三組。每組至少三個重復。各組同時檢測目標基因和管家基因的 Ct 值。下例中以 GAPDH 為管家基因。
2．Real-Time PCR 得到 siRNA 導入前后目標基因和管家基因的 Ct 值
各組重復實驗的 Ct 值差異不能過大；一般地，重復實驗 Ct 值差異在 1 以內是可以接受的。
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陰性對照（NC） |
Mock Transfection |
|||
Target Gene |
GAPDH |
Target Gene |
GAPDH |
Target Gene |
GAPDH |
30.40 |
23.63 |
24.21 |
22.66 |
26.21 |
24.60 |
30.35 |
23.40 |
24.60 |
22.56 |
26.15 |
24.31 |
30.41 |
23.52 |
24.66 |
22.48 |
26.35 |
24.72 |
3．Real-Time PCR 數據分析
管家基因)實驗組－( Ct 目的基因- Ct 管家基因)對照
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Target Gene |
GAPDH |
Ct |
Ct |
Target Gene |
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Target |
Ct– C |
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Average Ct |
Average Ct |
Gene–GAPD |
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Rel. to Mock |
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t, Mock |
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|
H |
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|
|
|
|
|
|
Moc |
26.24±0.1 |
24.54±0.2 |
1.7±0.21 |
0.00±0.2 |
1.0(1.16－0.86) |
k |
0 |
1 |
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
實 |
30.39±0.0 |
23.51±0.1 |
6.88±0.17 |
5.18±0.1 |
|
驗 |
|
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9*1 |
5*2 |
*3 |
7 |
031) |
組 |
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|
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|
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|
|
NC |
24.49±0.2 |
22.56±0.0 |
1.93±0.25 |
0.23±0.2 |
0.85(0.71－ |
|
4 |
9 |
|
5 |
1.01) |
使用方法
A．siRNA 轉染的方法
哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和 polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。
應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：轉染試劑的用量、siRNA 的用量、轉染時的細胞密度、轉染時的操作順序、細胞與轉染試劑/siRNA 復合物的溫浴的時間
B．Lipofectamin2000 轉染試劑
選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。
Lipofectamin2000 適用于核酸的體內和體外操作，可應用于 DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA
的轉染，也可應
用于 DNA/siRNA 的共轉染操作；是一種新型的高效 siRNA 轉染試劑。
Lipofectamin2000 的應用領域：
1、原代培養細胞和轉化細胞株的基因轉染
2、siRNA 高通量轉染試驗
3、DNA 轉染；DNA 和 siRNA 的共轉染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內導入試驗
5、貼壁細胞和懸浮細胞轉染
Lipofectamin2000 的特點：
1、不必更換培養基，操作簡便易行，可在半小時內完成操作
2、在含血清培養基中也能表現高轉染效率
3、細胞毒性低；適用細胞廣泛
4、即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染
5、基于脂質的轉染試劑，確保沒有 RNAse 活性
6、可介導 siRNA 高轉染細胞及體內 siRNA 的高效導入
C. Lipofectamin2000 適用的細胞類型
Lipofectamin2000 轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的 DNA 和 siRNA 轉染如：HeLa(人頸部癌細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒 5 DNA 轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4 細胞等。
D．轉染前細胞培養
在細胞板上培養細胞時，應使細胞匯合在 24 小時內達到 70-90%。
E．合適的 lipofectamin2000 用量
合適的 siRNA(DNA)：lipofetamin2000 比例對核酸的高效轉染有重要影響；我們推薦的 DNA：
lipofetamin2000 為 1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000 為 1：0.01-1：0.1（pmol：
ul）一般情況下，此范圍內都可獲得高的轉染效率。
F．貼壁細胞轉染程序
選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很重要。siRNA(DNA)和 lipofectamin 的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。
1、轉染前一天，4-5´104 細胞接種在 24 孔板上，0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM（或 Opti-MEM，
其他培養基）細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞數量，應能在 24 小時內使細胞匯合達到 70-90%。
3、在 50μl 的 DMEM（或 Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清培養基加入 20pmol siRNA(或
0.8μg DNA)，柔和混勻；
4、混勻 lipofectamin 試劑，用 50μl 無血清的 DMEM 或 Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀
分鐘；
5、將稀釋好的 siRNA 和 RNAi-Mate 試劑混合；輕柔混勻，室溫放置 20 分鐘,以便形成
siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）復合物。
6、將 100μl siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）復合物加到含有細胞和培養基的培養板
的孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板板。
7、 細胞在 CO2 培養箱中 37℃溫育 24h-48h 后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育 4-6 小時后，除去復合物，更換培養基。
G．懸浮細胞轉染程序
1、轉染的當天，收集細胞離心，用含 FBS 的培養基重懸。
2、在 50μl 的 DMEM（或 Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清的培養基加入 20pmol siRNA(或
0.8μg DNA)，柔和混勻；
3、混勻 lipofectamin 試劑，用 50μl 無血清的 DMEM 或 Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀
分鐘；
4、將稀釋好的 siRNA 和 lipofectamin 試劑混合；輕柔混勻，室溫放置 20 分鐘,以便形成
siRNA/lipofectamin（或 DNA/lipofectamin）復合物。
5、再加入 400μL 細胞懸浮液（細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間）。
6、細胞在 CO2 培養箱中 37℃溫育 24h-48h 后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育 4-6 小時后，除去復合物，更換培養基。
H．DNA 和 siRNA 共轉染細胞
1、在轉染的前一天，4-5´104 細胞接種在 24 孔板上，0.5 mL 含 FBS 和抗生素的細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞密度，應能在 24 小時內使細胞匯合達到 70-90%。
3、在 100μL 的無血清的培養基中稀釋 20pmol siRNA 和 0.2μg DNA，加入 2μl lipofectamin 試劑，充分混合，放置 20 分鐘,以便形成 siRNA/ DNA/lipofectamin 復合物。
4、將 siRNA/ DNA/lipofectamin 復合物加入培養基中，輕輕混勻。
5、細胞在 37℃溫育 24h-48h 后，進行轉染后的其它步驟。
I．siRNA 體內導入方法
1、適量的 siRNA 或 DNA 溶于不含 RNA 酶的無菌水中，輕輕混勻，因為注射液體積有限，建議采用高濃度的 siRNA 或 DNA，一般 DNA 為 2μg /μL、siRNA 為 10μg /μL。
2、取適量的 DNA、siRNA 或 siRNA\DNA 復合物與 lipofectamin 混合。例如，在 1#管中加入
0.5μL 的 DNA（1μg）和 0.5μL 的 siRNA（5μg），在 2#管中加入 0.55μL 的 lipofectamin（24μg）
3、制備的 siRNA/DNA-lipofectamine 復合物可用于體內導入 siRNA、DNA 或 siRNA\DNA。